技術文章 / article
小鼠VEGF ELISA試劑盒說明書
2016-02-19 瀏覽次數(shù)：1901
一. 小鼠VEGF ELISA試劑盒背景介紹：
血管內(nèi)皮生長因子 (VEGF) 是生長因子的亞家族，具體來說，屬于胱氨酸結生長因子中的血小板衍生生長因子 (PDGF) 家族。它們是重要的信號轉導蛋白，參與血管發(fā)生 (胚胎循環(huán)系統(tǒng)從形成) 和血管生成 (從已存在的脈管系統(tǒng)生長形成血管)。VEGF可刺激血管發(fā)生和血管生成。當血液循環(huán)不足時，可參與回復組織供氧系統(tǒng)。VEGFzui主要的作用是血管生成。在胚胎形成期，VEGF調控內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和存活，從而調控血管密度和大小，但無法決定血管的類型。在支氣管哮喘和糖尿病患者的血清中含有高濃度 VEGF。當 VEGF過表達時會引起疾病。供血不足時，實體腫瘤的大小受限；而表達 VEGF的腫瘤則會不斷生長并發(fā)生轉移。VEGF過表達會導致眼睛視網(wǎng)膜和身體其他部分的血管性疾病。貝伐珠單抗和雷珠單抗可抑制 VEGF，并控制或減緩疾病進程。
二. 小鼠VEGF ELISA試劑盒檢驗原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術。特異性抗小鼠 VEGF單克隆抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本和生物素化的檢測抗體，經(jīng)過孵育，樣本中存在的 VEGF與固相抗體和檢測抗體結合。洗滌去除未結合的物質后，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(streptavidin-HRP)。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中 VEGF的濃度成正比。加入終止液終止反應，在 450 nm波長(參考波長 570 - 630 nm)測定吸光度值。
三.小鼠VEGF ELISA試劑盒標本收集：
1.細胞培養(yǎng)上清
300 g離心 10分鐘去除沉淀物，即刻檢測, 或者分裝，-20℃以下貯存。
2.血清標本
分離管分離血清。在 1000 g離心之前，使血樣凝集 30分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測，或
者分裝，-20℃以下貯存。
3.血漿樣本
EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。1000 g離心 3 0分鐘收集樣本。即刻檢測，或者
分裝，-20℃以下貯存。
本試劑盒可能適用于其它生物學樣本。細胞培養(yǎng)上清、血清和血漿已經(jīng)過驗證。
注意：檢測前，樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴重溶血或高血脂的樣本。
樣本應分裝并貯存于-20℃，以避免小鼠 VEGF活性的丟失。如果在 24小時內(nèi)檢測，樣本可
以存放在 2 - 8℃。
避免樣本的反復凍融。在檢測前，冷凍樣本應該緩慢地恢復至室溫，輕柔地混勻。
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